聚合酶鏈反應(yīng)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室(PCR)是指通過(guò)基因擴(kuò)增的方式檢測(cè)特定的DNA 或 RNA 的檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室。
聚合酶鏈反應(yīng)(Polymerase Chain Reaction ,PCR)是一種在體外特異性擴(kuò)增靶 DNA序列的技術(shù),其基本過(guò)程為模板雙鏈DNA的變性、引物與模板DNA的退火和在DNA聚合酶引導(dǎo)下的鏈延伸反應(yīng)三個(gè)階段的多次循環(huán)。每一次循環(huán)后的擴(kuò)增產(chǎn)物均可作為下一輪循環(huán)的模板,理論上,擴(kuò)增產(chǎn)物量呈指數(shù)形式上升,即經(jīng)過(guò)n個(gè)循環(huán)后,產(chǎn)物量增加到2 n倍。PCR 試劑操作簡(jiǎn)單,短時(shí)間內(nèi)在體外可獲得數(shù)百萬(wàn)個(gè)特異靶DNA序列的復(fù)制,為臨床疾病的診斷、治療監(jiān)測(cè)和預(yù)后評(píng)估提供了一種極有幫助的實(shí)驗(yàn)室輔助手段。
PCR實(shí)驗(yàn)室除了潔凈間隔及通風(fēng)系統(tǒng)的設(shè)計(jì)建造外,實(shí)驗(yàn)室常規(guī)4個(gè)功能間的配套儀器設(shè)備清單如下,供參考:
1. 試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)的功能:貯存試劑的制備、試劑的分裝和擴(kuò)增反應(yīng)混合液的準(zhǔn)備,以及離心管、吸頭等消耗品的貯存和準(zhǔn)備。
配套用品一般應(yīng)當(dāng)包括:
(1)溫度調(diào)控范圍為 2℃~8℃和(或)-20℃以下冰箱;
(2)混勻器;
(3)微量加樣器;
(4)紫外消毒設(shè)備;
(5)消耗品:一次性手套、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭;
(6)專用工作服和工作鞋(套);
(7)專用辦公用品。
2.標(biāo)本制備區(qū)的功能:核酸(RNA、DNA)提取、貯存及加樣。
配套用品一般應(yīng)當(dāng)包括:
(1)溫度調(diào)控范圍為2℃~8℃和(或)-20℃以下冰箱;
(2)高速離心機(jī);
(3)混勻器;
(4)水浴箱或加熱模塊;
(5)微量加樣器;
(6)紫外消毒設(shè)備;
(7)生物安全柜;
(8)消耗品:一次性手套、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭(帶濾芯);
(9)專用工作服和工作鞋(套);
(10)專用辦公用品;
(11)如需處理大分子DNA應(yīng)當(dāng)具有超聲波儀。
3. 擴(kuò)增區(qū)的功能:DNA 合成、DNA 擴(kuò)增及檢測(cè)。
配套用品一般應(yīng)當(dāng)包括:
(1)核酸擴(kuò)增儀;
(2)微量加樣器;
(3)紫外消毒設(shè)備;
(4)消耗品:一次性手套、一次性帽子、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭(帶濾芯);
(5)專用工作服和工作鞋;
(6)專用辦公用品。
4. 擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)的功能:擴(kuò)增片段的進(jìn)一步分析測(cè)定。
視檢驗(yàn)方法不同而定,基本配置如下:
(7)微量加樣器;
(8)紫外消毒設(shè)備;
(9)消耗品:一次性手套、一次性帽子、加樣器吸頭(帶濾芯);
(10)專用工作服和工作鞋;
(11)專用辦公用品。
設(shè)備的維護(hù)保養(yǎng)應(yīng)當(dāng)建立設(shè)備維護(hù)保養(yǎng)規(guī)程,計(jì)量設(shè)備應(yīng)當(dāng)定期檢定。例如核酸擴(kuò)增儀、微量加樣器、生物安全柜、離心機(jī)應(yīng)當(dāng)每年進(jìn)行檢定或校準(zhǔn)工作。
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